pH応答性フェリチンナノキャリアによるレズベラトロール制御放出で標的腫瘍化学療法を実現

概要

本報告では、フェリチン（Ft）ベースのpH誘起可逆アッセンブリシステム（PIRAS）を標的腫瘍療法向けに提示します。Ftの天然pH感受性と独自の中空空洞を利用し、抗がん薬レズベラトロール（RV）の容易なロードと放出を開発しました。腫瘍特異的ターゲットペプチドArg-Gly-Asp（RGD）をRVロードFt（RV@Ft）表面に共役し、生体適合性ナノ粒子（RV@Ft-RGD）を形成しました。FtのpH感受性により、酸性条件下で中空多孔性ナノ球へ変性し、中性条件下で密閉中空ナノ球へ再生します。pH操作により、約21 nm径のRV@Ft-RGDは79.6%の高RVロード率を達成。pH 5.0で24時間後50.3%のpHトリガーRV放出を測定。中性条件下では20日間優れた安定性を示しました。共焦点蛍光イメージングで、RV@Ft-RGDが高細胞取り込み率とリソソームとの共局在を示し、主にRGD媒介ターゲット効果によるものでした。高薬物ロード、pHトリガー放出、腫瘍細胞ターゲティング効果に基づき、RV@Ft-RGDはin vitro/in vivoで優れた細胞殺傷能を示しました。in vitro/in vivo生体適合性も優れ、全身毒性はありませんでした。FtベースPIRASの設計概念は腫瘍増殖を有意に抑制し、ナノメディシンにおけるFt応用をさらに拡大します。

はじめに

肺がんは人間にとって最も致死的な固形悪性腫瘍の一つです。環境悪化等の要因で肺がん発症率は年々増加し、5年生存率はわずか17.4%です。現在、外科切除、放射線療法、標準一次化学療法など従来の臨床治療が利用可能ですが、肺がん患者の中央生存期間は依然として改善が必要です。したがって、この致死的疾患を治療するより効果的で安全な治療法の開発が急務です。現在、多くの化学療法薬の低標的効果と高副作用が化学療法での有用性を制限していますが、ナノ医薬品の新興分野で新規化学療法薬が常に開発されています。レズベラトロール（RV）はブドウや大豆など天然植物からの抽出物で、血小板凝集促進、血管拡張抑制、血液粘度低下などで臨床広く使用されてきました。近年、強力な抗がん効果も見出されています。しかし、潜在的低分子薬として、RVも他の一次化学療法薬と同様に、溶解性不良、血中半減期短、腫瘍選択性欠如などの欠点があります。近年、これら欠点を克服し治療効果を高めるRVベースナノ医薬品が開発されています。リポソーム、血清アルブミン、炭素材料、二次元遷移金属ダルコゲナイド（2D-TMDs）など様々なナノキャリアがRVロードに使用されてきました。これらナノキャリアはRV治療効果を効率的に高めると報告されていますが、リポソームと血清アルブミンの高効率アクティブトリガー放出能力、炭素材料と2D-TMDsの潜在的長期全身毒性など、依然として欠点があります。したがって、より優れたナノキャリアへの需要が依然としてあります。

フェリチンは、重鎖と軽鎖の24サブユニット相互作用とアッセンブリで形成される約8 nmルーメンを持つ天然ナノケージタンパク質です。内因性タンパク質であるため、フェリチンは優れた生体適合性と安全性を持ちます。また、フェリチンは環境が酸性からアルカリ性へ変化するにつれて可逆的に変性・再アッセンブリする天然pH感受性タンパク質との報告があります。pHが酸性では、分解したロッド状オリゴマーがヘッドセット型構造のみへ回復し、分解したヘッドセット型中間体が中空球状構造のみへ回復します。この独自のpHトリガーアッセンブリ/分解挙動により、フェリチンは理想的な薬物送達システムとなります。最近、Zhangらがドキソルビシン（DOX）分子をフェリチン内に封入し、pH調節で放出し腫瘍療法に成功したと報告しています。

本研究では、フェリチンベースpH誘起可逆アッセンブリシステム（PIRAS）を開発し、RVロードと放出を制御して腫瘍標的化学療法を強化することを目的としました。フェリチン球表面を腫瘍標的ペプチドRGDと連結。結果として得られたナノ医薬品RV@Ft-RGDは、中性・アルカリ環境（pH > 7.4）で安定し、酸性環境（pH < 7.4）でのみRVを放出することを実証しました。更なる特性評価で、RV@Ft-RGDがin vitro/in vivoで以下の利点を示しました：(1) RV@Ft-RGDが腫瘍細胞を標的とし、リソソーム（酸性環境）に蓄積し、より多くのRVを細胞質へ放出促進；(2) フェリチンキャリアが遊離RVの血中半減期を大幅に延長し、全身循環での薬物保持を改善して腫瘍部位への薬物蓄積を促進；(3) フェリチンの構造的安定性が送達過程でのRVバーストリークを防止；(4) RV@Ft-RGDが優れたin vitro/in vivo生体適合性を示す。これら利点により、RV@Ft-RGDは優れた抗腫瘍治療特性を示し、将来の臨床翻訳へ大きな可能性を示します。

材料と方法

材料

フェリチン、レズベラトロール（RV、≥99%）はSigma-Aldrich製。1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド（EDC）、N-ヒドロキシスクシニミド（NHS）、フルオレセインイソチオシアネート（FITC）はAladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd（上海、中国）製。NH₂-PEG₂₀₀₀-RGDはHunan Huateng Pharmaceutical Co., Ltd（湖南、中国）製。DMEM培地、胎児牛血清（FBS）、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）はInvitrogen（Carlsbad, CA, USA）製。Cell Counting Kit-8（CCK-8）は同仁化学（日本）製。

RV@Ft-RGD合成

RVロードは先行報告に従い修正を加えて調製しました。まず、NH₂-PEG₂₀₀₀-RGD（10 mg）をFt溶液（1.5 mg/mL）に、EDC（5 mg/mL）20 μLとNHS（20 mg/mL）20 μL存在下で分散。混合物を4°Cで2時間軽く攪拌反応させ、透析（MWカットオフ=5 kDa）で一晩精製し、Ft-RGDナノ粒子を得ました。次に、水不溶性RVをDMSOで2 mg/mLに溶解し、最終濃度1.5 mg/mLでFt-RGD溶液へ添加。混合物pHを5に調整しポリペプチドサブユニットを分解。その後、水酸化ナトリウム（1 M）で混合物pHを7.4へゆっくり調整しポリペプチドサブユニットを再アッセンブリ。結果溶液を蒸留水で一晩透析し遊離RV分子を除去して最終製品（RV@Ft-RGD）を得ました。ロードRV量はUV-vis分光光度計（UV3100、島津、日本）で306 nm吸収ピーク監視により検出。RVロード率は(A_a − A_b)/A_cで、A_a、A_b、A_cはそれぞれ初期、非ロードRV、Ft-RGD重量を表します。

特性評価

動的光散乱（DLS）法（BI-9000AT、Brookhaven、USA）でナノ粒子サイズとゼータ電位を検出。ナノ粒子形態は透過型電子顕微鏡（TEM、JEM-100S、JEOL、日本）で観察。蛍光スペクトルはPerkin-Elmer LS50B発光分光光度計で検出。細胞蛍光信号は市販レーザー走査顕微鏡（LSM 510、Zeiss、ドイツ）とフローサイトメトリー（FCM、EPICS XL、Beckman、USA）で記録。

RV放出試験

RV@Ft-RGD溶液500 μLをD-チューブ（MWCO 6–8 kDa、Novagen）に入れ、異なるバッファーで溶液pHを調整。37°Cで透析。異なるインキュベーション時間後、透析液1 mLを採取し同量の新鮮培地で置換。異なるインキュベーション時間でのRV放出量をUV-vis分光光度計で測定。さらに、RV@Ft-RGDをpH 5、6.5、7.4、8.5の異なるpH条件洗浄液に溶解。37°Cで24時間インキュベート後、DLSでナノ粒子サイズを特性評価。

細胞培養

ヒト肺がん細胞A549とNCI-H358を中国科学院細胞バンク（上海、中国）から入手し、10% FBSと1% ペニシリンストレプトマイシン（PS）含むDMEM培地で、5% CO₂含有加湿雰囲気、37°Cで培養。

RV@Ft-RGD細胞取り込みと局在

一般的手法としてFITCでナノ粒子を標識。FITCをエタノール溶液（2.0 mg/mL）に溶解し、RV@FtとRV@Ft-RGD水溶液（1.0 mg/mL）と暗所室温で4時間攪拌混合。混合物を蒸留水で一晩透析し余分なFITCとエタノールを除去し、FITC標識RV@FtとRV@Ft-RGD溶液を得ました。ナノ粒子の細胞小器官局在を確認するため、FITC標識RV@FtとRV@Ft-RGDで5時間処理した細胞をリソソーム特異染料Lyso Tracker Red（Invitrogen）で染色。その後、共焦点レーザー走査顕微鏡でRV@FtとRV@Ft-RGDの細胞内取り込みを観察。簡単に、A549細胞を同濃度FITCのFITC標識RV@FtとRV@Ft-RGDで5時間インキュベート。その後、Lyso Tracker Red溶液（100 nM）で37°C、30分処理。PBSで3回洗浄後、市販レーザー走査顕微鏡で観察。ImageJソフトウェアで細胞蛍光強度を解析。

in vitro腫瘍化学療法とアポトーシス試験

まず、キャリアFt-RGD細胞毒性を標準CCK-8アッセイ（Bestbio、中国）で評価。A549とNCI-H358細胞（1 × 10⁵ cells/mL、0.5 mL）を96ウェルプレートに播種し24時間培養。古い培地を廃棄後、0、0.01、0.1、0.5、1 mg/mL Ft-RGD含む新鮮培地でA549とNCI-H358細胞を24時間インキュベート。PBSで3回優しく洗浄。CCK-8作業液（10% CCK-8 + 90% DMEM）100 μLを各ウェルに添加し37°Cで30分インキュベート。マイクロプレート分光光度計（Multiskan FC、Thermo Scientific）で450 nm吸光度測定。各群細胞写真を光学顕微鏡（Olympus）で観察。

遊離RV、RV@Ft、RV@Ft-RGD、RV@Ft-RGD + RGDの様々な濃度（0、10、20、30、40 μg/mL RV換算）でA549細胞を処理。24時間インキュベーション後、CCK-8アッセイで処理細胞生存率を解析。同時に、これら処理細胞をアポトーシス検出キット（Annexin V-FITC/PI）で二重染色しFCMで解析。

血中RV@Ft-RGD循環時間

遊離RVまたはRV@Ft-RGD（6 mg/kg RV換算）を健康Balb/cヌードマウス（n=5/群）へ静脈注射。注射後、異なる時点でマウス静脈血を採取しヘパリン含有採血管に入れ、血漿を分離。RV濃度を酸性イソプロパノール試薬で抽出し、306 nm励起吸光度測定で濃度決定。

動物モデルとin vivo腫瘍化学療法

本研究で使用したBalb/cマウス（4–6週齢）はCharles River Laboratories（北京、中国）から購入。動物実験全操作は実験動物飼育使用ガイドラインに厳密に従い、鄭州大学動物実験委員会承認済み。A549皮下腫瘍モデル確立のため、2 × 10⁶ A549細胞をマウス背部へ皮下注射。7–9日間飼育。腫瘍体積計算式は長径 × 短径²/2。

A549腫瘍保有マウスを5群へ無作為分割。各群5匹。グループ：対照（生理食塩水）、RV、RV@Ft、RV@Ft-RGD。治療開始時、試料を尾静脈注射で1日1回、3日連続投与。腫瘍体積とマウス体重を5日ごと記録。45日治療後、各群腫瘍を回収。腫瘍組織を10%ホルマリン溶液で固定、切片化、ヘマトキシリン・エオシン（H&E）染色実施。

in vivo生体適合性

RV@Ft-RGD 200 μLを健康Balb/cマウスへ尾静脈注射（RV用量15 mg/kg）。同法で生理食塩水注射健康マウスをブランク対照群として使用。注射後0、10、45日目にマウス血液採取し、白血球（WBC）、赤血球（RBC）、ヘモグロビン（HGB）、平均血小板容積（MPV）、平均赤血球ヘモグロビン（MCH）、ヘマトクリット（HCT）、平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）、平均赤血球容積（MCV）、血小板（PLT）等血球計数評価。さらに、心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓組織を各群45日目に回収しH&E染色実施。

統計解析

データを平均±標準偏差（s.d.）で提示。サンプル統計解析はStudentのt検定で実施、p < 0.05を統計的有意と判定。

結果と考察

RV@Ft-RGD合成と特性評価

RV@Ft-RGDからのRVロードと放出は、FtのpH誘起可逆的分解と再アッセンブリにより実施（図1）。まず、フェリチンを腫瘍標的ペプチドRGDと共役しFt-RGDを形成。これを酢酸緩衝液（pH=5）で再溶解しポリペプチドサブユニットを分解して中空多孔性球体形成。RV分子を添加し空洞内へ進入させ、その後溶液pHを約7.4へゆっくり調整しFtを再アッセンブリしRV分子を密閉Ft空洞内へトラップ。バッファーpHを約5へ低下させると、ナノ粒子ポアが可逆的に開きRV分子を放出。図2aと補足図S1に組み立て済みRV@Ft-RGDのSEMとTEM像を示し、球状構造を表示。DLS解析で、RV@Ft-RGD粒子径は約22.5 nmで、未加工Ftナノ粒子（約11.8 nm）より大きく（図2b）、未加工Ftナノ粒子と類似のゼータ電位（−29.6 mV）を示しました（図2c）。20日後、水、FBS、細胞培地、PBS中のRV@Ft-RGDポリ分散指数（PDI）に有意変化なし（図2d）、RV@Ft-RGDの優れたコロイド安定性を示唆。図2eに遊離RV、Ft-RGD、RV@Ft-RGD吸収スペクトルを示す。RV@Ft-RGD吸収スペクトルが、RVとFt-RGDと比較して306 nm（RV由来）に新ピークを示し、RVロード成功を示唆。さらに、RV@Ft-RGDは325 nmレーザー励起で遊離RVと類似の有意な発光蛍光を400 nmで示しました（図2f）。

RV@Ft-RGD調製と腫瘍標的化学療法の模式図

a RV@Ft-RGD TEM像。b、c Ft-RGDとRV@Ft-RGDのサイズ分布とゼータ電位分布。d 水、FBS、細胞培地、PBS中でのRV@Ft-RGD PDI変化（20日間）。e 遊離RV、Ft-RGD、RV@Ft-RGD吸収スペクトル。f 遊離RVとRV@Ft-RGD吸収スペクトル

薬物ロードと放出

Ft-RGD最大ロード容量は252.6%で、中空Ft-RGD内部の大きな空洞による可能性。FtがpH感受性であるため、異なるpH条件下でRVロード容量を特性評価。図3a示す通り、pH 5.0から8.5へ上昇に伴いRVロード効率が劇的に低下。複合体からのRV放出もpH 5.0から8.5で特性評価。このデータからpH値と時間依存RV放出プロファイルを構築（図3b）。最大薬物放出比（51.6%）はpH=5.0で24時間、pH=6.5、7.4、8.5より高値。関連報告によると、pH 5.0、6.5、7.4はそれぞれ細胞リソソーム、腫瘍組織、血液、正常生理環境で典型的に見られる値。生理条件（pH7.4）では、RV@Ft-RGDのRV薬物含量が50時間後でも高いままでした（図3c）、RV@Ft-RGD中のRVが安定で容易にリークしないことを示唆。さらに、RV@Ft-RGDの径変化を複数pH条件で調査。37°Cで12時間インキュベーション後、DLS解析でRV@Ft-RGD径はpH8.5と7.4で約23 nmでほぼ一定。pH値を6.5と5.0へ低下させると、RV@Ft-RGD径はそれぞれ25 nmと28.6 nmへ増加（図3d）。これら結果は、RV@Ft-RGDのpH誘起可逆的分解と再アッセンブリ挙動を確認し、in vitroでの制御可能な薬物ロードと腫瘍組織での薬物放出に有益です。

a 種々pH条件下でのFt-RGDロード効率。b pH 5.0から8.5でのRV@Ft-RGDからのRV放出プロファイル。c 生理条件下でのRV@Ft-RGD残留RV。d pH 5.0から8.5でのRV@Ft-RGD平均サイズ変化

in vitro細胞取り込みと局在

in vitro細胞取り込みとRV@Ft-RGD局在を評価。まず、RV@FtとRV@Ft-RGDを水素結合相互作用と物理吸着でFITC標識。図4a示す通り、遊離FITC処理細胞は無視できる細胞質蛍光信号。対照的に、RV@Ft-RGD処理細胞は強いFITC緑色蛍光を示し、RV@Ft処理細胞より高値。特筆すべきは、RV@Ft-RGD処理とRGD前処理細胞の両方が低緑色蛍光を示したこと。これら結果から、RV@Ft-RGDが大量に細胞取り込みされ、おそらくRGD媒介アクティブターゲット効果によるものと結論付けられます。これら処理細胞をFCMでも解析、結果を図4bに示す。細胞蛍光強度統計結果も類似結論を支持。

a 遊離FITCとFITC標識RV@Ft、RV@Ft-RGD + RGD、RV@Ft-RGDインキュベーション後A549細胞蛍光像。スケールバー=60 μm。b 遊離FITCとFITC標識RV@Ft、RV@Ft-RGD + RGD、RV@Ft-RGDインキュベーション後A549細胞FCM測定細胞FITC蛍光強度。c FITCとLyso Tracker Red細胞蛍光共局在係数。**P < 0.01、各群と比較

RV@Ft-RGD小器官局在を調べるため、ナノ粒子インキュベート細胞をリソソーム特異染色色素（Lyso Tracker Red）で染色。図4aで、全群で細胞質に強い赤色蛍光観察。FITC緑色蛍光とマージ後、RV@Ft-RGDがこれら群中で最も強い黄色（緑+赤）蛍光を細胞質で示しました。統計解析ベースで、RV@Ft-RGD処理群がFITCとLyso Tracker Red蛍光間で最高共局在係数を示しました（図4c）。これら結果は、RV@Ft-RGDが活発に細胞内へ入り、その後リソソーム酸性環境（pH≈5.0）へ移行することを示します。これら長所とpH応答性薬物放出が相まって、RV@Ft-RGDにin vivo腫瘍療法への多くの潜在応用を与えます。

in vitro生体適合性と腫瘍療法

RV@Ft-RGD抗腫瘍特性研究前、キャリアFt-RGD細胞毒性を調査。図5aと補足図S2、S3示す通り、Ft-RGDは肺がんA549細胞とNCI-H358細胞へ、濃度1 mg/mLまで明確な生存率抑制なし。細胞形態も、1 mg/mL処理細胞と対照群比較で有意変化なし（図5b）、Ft-RGDがキャリアとして優れた生体適合性を持つことを明確に示唆。図6a、b示す通り、遊離RV、RV@Ft、RV@Ft-RGD全てが濃度依存的に細胞を殺傷。RV@Ft-RGD処理細胞はより生存率低下し、40 μg/mL群でわずか11.2%細胞生存率で、RV@FtとRV@Ft-RGD + RGD前処理群より低値。FCMによる予備研究で、RV単独、RV@Ft、RV@Ft-RGDいずれでも、細胞死大多数がアポトーシス経由であることが判明（図6c）。これら結果は、RV腫瘍細胞殺傷効果がFt-RGDロードで大幅強化されることを示し、主にRV@Ft-RGDのリソソーム蓄積増加によるもので、酸性リソソームpH条件がアポトーシス促進RVの細胞質への放出増加をトリガーします。

a 24時間異なる濃度Ft-RGD処理A549細胞in vitro細胞毒性。b 1 mg/mL Ft-RGDで24時間処理後A549細胞顕微鏡像

a 異なる濃度RV処理A549細胞細胞生存率。b RV@Ft、RV@Ft-RGD + RGD、RV@Ft-RGD処理細胞生存率（RV様々な濃度）。c PBS（対照）、RV、RV@Ft、RV@Ft-RGD + RGD、RV@Ft-RGD処理A549細胞アポトーシス（フローサイトメトリー）。**P < 0.01、各群と比較

RV@Ft-RGD血中半減期

遊離RVとRV@Ft-RGD処理群で、注射後異なる時点の血漿RV濃度を調査。図7a示す通り、RV@Ft-RGD血中半減期は5.1 ± 0.23時間。遊離RVはより速く循環から洗い出され、血中半減期はわずか0.43 ± 0.11時間。RV@Ft-RGDの血中半減期大幅延長は、全身循環での薬物保持改善と腫瘍部位への薬物蓄積促進に有益です。

a 遊離RVとRV@Ft-RGD血中循環時間。b 生理食塩水（対照）、RV、RV@Ft、RV@Ft-RGD + RGD、RV@Ft-RGD三回静脈注射後A549異種移植腫瘍増殖プロファイル。赤矢印は注射時点。**P < 0.01、各群と比較。c 様々治療後腫瘍保有マウス体重。d 治療終了後各群マウスから回収腫瘍切片H&E染色顕微鏡写真。スケールバー50 μm

RV@Ft-RGD in vivo抗腫瘍効果と全身毒性

図7bに異なる治療群腫瘍保有マウス腫瘍増殖プロファイルを相対腫瘍体積で表示。RV@Ft処理群で腫瘍増殖がある程度抑制、おそらくRV@Ft低取り込みによる。しかし、RV@Ft-RGD処理群では、他群（対照、RV、RV@Ft、RV@Ft-RGD + RGD）と比較して腫瘍増殖が有意に抑制されました。治療中、いずれの実験群でも体重顕著減少なし（図7c）、RV@Ft-RGDの高い生物学的安全性を示唆。治療コース終了後、これら群腫瘍組織H&E染色実施し化学療法効果を調査。図7d示す通り、RV@Ft-RGD処理腫瘍で広範囲アポトーシス観察、遊離RV、RV@Ft、RV@Ft-RGD + RGD処理腫瘍のわずかなアポトーシス領域と有意な対比。さらに、正常マウスでRV@Ft-RGD全身毒性も評価。生理食塩水とRV@Ft-RGD処理健康マウス全血サンプルを注射後0、10、45日目に採取し血液解析。図8a、b示す通り、RV@Ft-RGD注射マウス全血球計数（WBC、RBC、HGB、MPV、MCH、HCT、MCV、PLT、MCHC）が0日から45日間で有意差なし。健康マウス主要臓器を生理食塩水とRV@Ft-RGD処理で45日目に回収しH&E染色。これら組織に明確副作用なし（図8c）、無視できる長期有害毒性を示唆。これら全結果が、RV@Ft-RGDのin vivo強化がん化学療法への有望な可能性を実証します。

a 45日間RV@Ft-RGD処理健康マウス血液解析。b 45日間RV@Ft-RGD処理健康マウス主要臓器H&E染色像。c 対照とRV@Ft-RGD処理群主要臓器HE染色像。スケールバー50 μm

結論

要約すると、抗腫瘍RV薬のpH制御可能なロードと放出を持つpH誘起可逆アッセンブリシステム（PIRAS）を、強化腫瘍標的化学療法向けに開発成功しました。酸性条件（pH=5.0）ではシステムが分解しRVロード/放出可能、中性条件（pH=7.4）ではRV@Ft-RGDが高安定で薬物リークほぼなし。RGD媒介ターゲット効果により、RV@Ft-RGDがA549細胞へ高濃度取り込まれリソソーム蓄積、in vitro/in vivoでRV放出に有益。RV@Ft-RGDリソソーム蓄積と酸性リソソームpHトリガーRV細胞質放出により、遊離RVと比較して優れた腫瘍細胞殺傷とアポトーシス促進効果を示しました。さらに、RVをFt-RGDへロード後、RV@Ft-RGDは遊離RVより大幅に長い血中半減期を示しました。in vivo結果で、RV@Ft-RGDが顕著な腫瘍抑制と無視できる全身毒性を示すことを実証。本研究は、FtベースPIRASが強化抗がん療法向け薬物ロードと放出に高効率であることを示唆します。

データおよび資料の入手可能性

本原稿の結論は、本論文で全て提示・示されているデータに基づいています。

略語

BSA:

牛血清アルブミン

CCK-8:

Cell counting kit-8

DLS:

動的光散乱

EDC:

1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド

FBS:

胎児牛血清

FITC:

フルオレセインイソチオシアネート

Ft:

フェリチン

HCT:

ヘマトクリット

HGB:

ヘモグロビン

MCH:

平均赤血球ヘモグロビン

MCHC:

平均赤血球ヘモグロビン濃度

MCV:

平均赤血球容積

MPV:

平均血小板容積

NHS:

N-ヒドロキシスクシニミド

PIRAS:

pH誘起可逆アッセンブリシステム

PLT:

血小板

RBC:

赤血球

RGD:

Arg-Gly-Asp

RV:

レズベラトロール

WBC:

白血球