オレアノール酸の高分子ミセルの開発とその臨床的有効性の評価

はじめに

肌の老化には、たるみ（たるみ）、薄化、しわなどがあります。それは、感染、喫煙、紫外線、外傷、ホルモンの不均衡、ストレス、および/またはエラスチナーゼまたはコラゲナーゼを含むヒドロラーゼなどの酸化促進剤によって加速される可能性があります[1]。上記の原因によって生成された活性酸素種またはフリーラジカルは、隣接する細胞に損傷を与え、皮膚の弾力性を低下させ、薄くなります[2、3]。特に、紫外線は活性酸素種の生成を引き起こし、膜脂質、細胞タンパク質、およびDNAに損傷を与え、それによって発現のしわ、そばかす、および肝斑の発症を加速することが知られています[1,2,3,4]。オレアノール酸は、いくつかの植物種から抽出され、主要な医療および化粧品成分として使用される天然植物由来の有効成分です。リンゴやナシなどの果物にも含まれています[5]。ヒドロキシ五環性テルペンの一種として、オレアノール酸は最初にオリーブ（ Olea europaea ）から単離されました。 ）葉であり、東アジアのセンブリ（ Eugenia jambos ）を含む植物に広く見られます ）と黄色のリンドウ（ゲンチアナルテア ）。コラーゲン合成に重要なプロコラーゲンだけでなく、セラミドやフィラグリンの合成や、コラーゲンなどのたんぱく質を分解する酵素であるMMP-1の活性を阻害することで、アンチエイジング機能を促進します。 5、6]。これらの知見から、オレアノール酸はコラーゲンの生成を促進するだけでなく、コラーゲンの分解を防ぐことにより、二重の老化防止効果があると推測できます[7]。その結果、オレアノール酸は化粧品の非常に有望なアンチエイジング成分です。しかし、化粧品にオレアノール酸を主成分として使用することは、水溶性が低いために制限されます。したがって、乳化製剤の一部として少量のオレアノール酸のみが化粧品の補助成分として使用されてきました[8]。皮膚吸収に関連するその物理化学的特性には、その融点、分子量、分配係数、および親水性が含まれます。融点は300℃以上であり、結晶性の高い材料であることを示しています。結晶性の高い材料は、溶解に大きなエネルギーを必要とし、溶解度が限られているためバイオアベイラビリティが低く、吸収が不十分です[9]。さらに、親水性または親油性の高い化合物、または高分子量の化合物は、皮膚に浸透しにくいことが知られています[10、11]。そのような分子の皮膚浸透を改善するために最も頻繁に使用される方法は、前駆体の合成またはコロイド状薬物担体の使用である。この点で、リポソーム、エマルジョン、および高分子ミセルが活発に研究されてきました[12]。

高分子ミセルは、水溶液中でコアシェル構造を形成する自己組織化ナノスケール凝集体です。高分子ミセルは、疎水性の内核と親水性の外殻を形成できるジブロックまたはトリブロック共重合体でできていることがよくあります[13、14]。高分子ミセルの特性はブロックコポリマー中の高分子モノマーの種類と比率によって異なり、臨界ミセル濃度が比較的低いため、高分子ミセルは界面活性剤ミセルよりも物理的に安定していると考えられています[15、16]。

この研究では、オレアノール酸の高分子ミセルを調製し、それらの粒子サイズと形状、および結果として得られるオレアノール酸のカプセル化効率と皮膚透過率を評価しました。この形態のオレアノール酸の物理的安定性も3ヶ月間評価されました。実際の化粧品配合におけるオレアノール酸の人間のしわ防止効果も調査されました。

材料と方法

資料

オレアノール酸、Tween 80、Tween 20、およびTween 60は、TCI（東京、日本）から購入しました。 PEG 400、Pluronic F127、およびPluronic F68は、BASF（ルートヴィヒスハーフェン、ドイツ）から入手しました。ポリエチレングリコール、PEG 300、およびPEG 200は、JUNSEI（東京、日本）から入手しました。 TRANSCUTOL P、LABRASOL、LAUROGLYCOL FCC、LABRAFAC、Capryol®90、およびCapryol™PGMCは、Gattefossé（リヨン、フランス）から購入しました。二ナトリウムEDTA（Daejung Chemical＆Metals Co.、Ltd.、Siheung、Korea）、アラントイン（Sigma Aldrich、St。Louis、MI、USA）、ジプロピレングリコール（Daejung Chemical＆Metals Co.、Ltd.、Siheung、Korea）、プロパンジオール（DuPont Tate＆Lyle Bio Products Company、LLC、Loudon、USA）、カルボマー（The Lubrizol Corporation、Ohio、USA）PEG / PPG /ポリブチレングリコール-8/5/3グリセリン（NOF Corporation、Tokyo、Japan）、ナトリウムヒアルロン酸塩（TCI、東京、日本）、ベータグルカン（SK Bioland、Cheonan、韓国）、フェノキシエタノール（Daejung Chemical＆Metals Co.、Ltd.、Siheung、韓国）、カプリリルグリコール（J TWO K BIO CO。、Ltd。 、Cheongju、韓国）、およびエチルヘキシルグリセリン（J TWO K BIO CO。、Ltd.、Cheongju、韓国）を使用して、オレアノール酸を含む化粧品を調製した。 HPLCグレードのアセトニトリルはBurdick＆Jackson（Muskegon、MI、USA）から入手しました。三回蒸留水を使用し、他の溶媒と試薬はEPおよびGRグレードでした。 Crlori：SKH1時間の無毛雌マウスは、OrientBio（Seongnam、Korea）から購入しました。

HPLC分析

オレアノール酸は、島津LC-30シリーズHPLC（島津製作所、京都、日本）を使用して分析しました。 Kromasil 100 C18 250mm×4.6mm、5μm、分析カラム（Teknokroma、バルセロナ、スペイン）を周囲温度で使用しました。移動相はアセトニトリルと水（85：15、v / v）で構成され、流量は1 mL / min、注入量は10μLでした。オレアノール酸はUV λで分析されました =210nm。すべての測定は周囲温度で行われました[17]。

溶解性と製剤の最適化の研究

測定した量のオレアノール酸を可溶化剤に加え、60°Cで48時間撹拌し、超音波洗浄機を使用して5分間超音波処理しました。 Universal 320R遠心分離機（Hettich、Tuttlingen、Germany）を使用して、懸濁液を2000 rpmで遠心分離し、上清を回収しました。次に、上清を0.45μmPVDFメンブレンフィルター（Whatman、ケント、英国）でろ過しました。対応する可溶化剤へのオレアノール酸の溶解度は、オレアノール酸と可溶化剤の初期重量の合計から残りの固形物の重量を差し引くことによって推定されました（表1）。

配合最適化研究は、ポロキサマー188、ポロキサマー407、Tween 60、およびTween 80を使用して実施しました。表2に要約するように、両親媒性ポリマーと界面活性剤のさまざまな比率を試しました。透明な溶液が観察されるまで60°C以上で。次に、表2に示すポリマー/界面活性剤を透明な溶液に加え、透明な溶液が観察されるまで60℃以上で撹拌しました。次に、溶液を蒸留水に分散させました（図1）。得られた溶液を約48時間放置した後、目視検査を行って最適な製剤を選択しました。沈殿、相分離、透明性、およびゲル化の観察を含む、表2の各配合物の目視検査の結果は、表3に要約されています。

オレアノール酸ミセルの調製の概略図

オレアノール酸の高分子ミセルの調製

オレアノール酸（PMO）の高分子ミセルは、図1に示す方法を使用して、表2の製剤GおよびHを使用して調製しました。臨床試験。

染色テスト

配合物Ｇまたは配合物Ｈが水に分散されたときの高分子ミセル化は、目視観察、すなわち透明性によって確認された。 PMOの形成（PMO-GまたはPMO-H）も染色試験で確認されました。水とCapryol®90、水、Capryol®90、PMO-G、およびPMO-Hの混合物にメチレンブルーを添加し、溶液の色を視覚的に観察して写真を撮りました。

粒度測定

ELS（電気泳動光散乱）技術は、粒子が明確な電場でランダムなブラウン運動と配向した電気泳動運動の両方を示す場合に、時間の関数として粒子からの散乱強度の変動を測定します。粒子の電気泳動移動度はELS技術[18]で測定され、PMO-GとPMO-Hの両方の粒子サイズを電気泳動光散乱分光光度計（ELS-Z、Photal、大塚電子、日本）を使用して評価できます。

走査型電子顕微鏡（Cryo-SEM）分析

極低温走査型電子顕微鏡または走査型電子低温顕微鏡（cryo-SEM）は、コロイド状ポリマー懸濁液または分散液が急速凍結によって固定化され、イメージングのために破砕された後の微細構造またはナノ構造の状態を視覚化するための強力な手法です。破壊は、液体窒素の通常の沸点であり、バルク粒子と完全合体粒子の両方のガラス転移温度よりはるかに低い-196°Cで行われ、検査されます。 Cryo-SEM画像は、氷を通過して粒子を通過する破壊に対する粒子のさまざまな応答を明らかにします[19]。走査型電子顕微鏡（Tescan Mira 3 LMU FEG / Quorum Technologies PP3000T Cryo-SEMサンプル準備システム）を使用して、PMOの形状を観察しました。

カプセル化の効率

オレアノール酸高分子ミセルのカプセル化効率を評価した。 PMOを2000rpmで15分間遠心分離し、上清を収集してHPLCで分析しました。カプセル化効率は、高分子ミセル中のオレアノール酸の量を、PMO調製中に最初に添加されたオレアノール酸の量（mg）で割ったものとして計算されました。

PMO-Hの安定性

PMO-Hの物理的安定性は、40°Cで3か月間保管することによって評価されました。色の変化、相分離、沈殿物の存在、および濁度の変化を視覚的に評価しました。一定の時間間隔で採取されたPMO-Hサンプルは、残っているオレアノール酸の量を決定するためにHPLCによって分析され、PMO-H粒子サイズを決定するためにELS-Zによって分析されました。結果を図9に示します

体外皮膚透過試験

フランツ拡散セルを使用してinvitro皮膚透過試験を実施し、オレアノール酸の皮膚透過の増強を調査しました。試験は、PMO-G、PMO-H、蒸留水に分散させたオレアノール酸とTween 80の混合物、および蒸留水に分散させたオレアノール酸とプロピレングリコールの混合物で実施しました。 6週齢の雌の無毛マウスの皮膚を必要なサイズに切り分けた。垂直フランツセルを使用し、角質層を上に向けて皮膚を2つのチャンバーの間に固定しました。選択した製剤330μlを皮膚に塗布し、フランツ細胞をパラフィルムで覆った。受容体は、9：1（v / v）の比率でPBS溶液（pH 7.4）とエタノールで満たされました。受容体溶液は、サンプリング時間ごとに新鮮なPBS溶液で補充された。サンプルは2、4、6、8、10、20、および24時間で回収され、HPLCで分析されました。 24時間後、皮膚に残っている余分な製剤をキムワイプ（キンバリークラークの専門家、オーストラリア、ニューサウスウェールズ州）で取り除きました。浸透試験で使用した皮膚をPBS溶液で洗浄し、皮膚に残っているオレアノール酸をHPLCで測定しました。すべての浸透実験は3回行った。

調査の統計

実験は独立して3回の繰り返しで行われ、この研究の結果は平均±SDとして報告されました。統計分析は、独立した t によって検証されました テスト、および p の値 <0.05は統計的に有意であると見なされました。

PMO-Hによるアンプルの準備

臨床試験では、PMO-Hを試験製品として使用しました。 PMO-H、精製水、EDTA二ナトリウム、アラントイン、ジプロピレングリコール、プロパンジオール、カルボマー、およびPEG / PPG /ポリブチレングリコール-8/5/3グリセリンを添加し、マグネチックスターラーを使用して10〜15分間攪拌した後、カリウム水酸化カリウムを加え、混合物をさらに5〜10分間撹拌した。成分が均一に混合されたら、ヒアルロン酸ナトリウムとベータグルカンを加えてさらに2〜5分間撹拌し、次にフェノキシエタノール、プロパンジオール、カプリリルグリコール、およびエチルヘキシルグリセリンを加えて2〜5分間撹拌しました。最終的な処方は、テスト製品としてアンプルに追加されました。テスト使用の前に、真空ドライオーブンを使用してアンプルの気泡を除去した。オレアノール酸を除外したことを除いて、試験製品と同じ方法に従って対照を調製した。

人間のアプリケーションテスト

人間の皮膚刺激性試験

アンプルにPMO-Hを含む化粧品の皮膚パッチテストを、ヒトの皮膚刺激性試験への参加に同意した22歳から56歳までの25人の男性と女性の被験者に対して実施しました。各試験物質を上腕に落とし、パッチで固定した。パッチは24時間取り付けられ、刺激の程度は、International Contact Dermatitis Research Group（ICDRG）の基準に従って、パッチ除去の30分後、24時間後、および48時間後に2人の専門家によって観察されました。

しわ改善のための臨床試験

しわ改善試験への参加に同意した30歳から65歳までの23人の女性被験者の目の周りに、最終製品としてオレアノール酸をアンプルに含む高分子ミセルを塗布しました。被験者は、選択基準を満たし、除外基準を満たさず、人間のアプリケーションテストに参加することに同意しました。二重盲検法は、研究者と被験者の両方によって追跡されました。テストは8週間実施され、評価は4週間ごとに実施されました。二重盲検法とランダム割り当てが使用されました。試験製品と対照は、同じ被験者の顔の左側または右側のいずれかにランダムに別々に適用されました。 5つのパラメーターは、Skin Visiometer SV 700（Courage + Khazaka electronic GmbH、ケルン、ドイツ）を使用した光学プロフィロメトリーによって4週間ごとに8週間評価されました。平均粗さ（R3）が主要エンドポイントであり、皮膚粗さ（R1）の4つのパラメーターです。 、最大粗さ（R2）、滑らかさの深さ（R4）、および算術平均粗さ（R5）が2番目のエンドポイントでした。被験者の同じ領域での5つのパラメーターの増加または減少を経時的に測定し、5つのパラメーターの増加または減少の平均値を計算して、対照と試験製品の治療間で比較しました。さらに、皮膚の視覚的観察は専門家によって行われました。目のしわの写真は、Janus 1 Mark II（PIE Co.、Ltd.、Suwon、Korea）を使用して撮影されました。視覚的評価スコアを決定するために使用される基準を図S1に示し、視覚的結果を図13に示します。パラメーターは、ペアサンプル t を使用して比較および分析されました。 95％の信頼性でテストします[20、21、22、23、24、25]。

結果と考察

可溶化剤、界面活性剤、およびポリマーの測定

生体適合性可溶化剤、特に界面活性剤およびポリマーへのオレアノール酸の溶解度を表1に示します。オレアノール酸は、親水性-親油性バランス（HLB）が低い疎水性油に溶解する傾向があります。 Capryol®90は、一般的なオイルと比較してわずかに高いHLB値を持っています[26]。ただし、オレアノール酸はCapryol®90に比較的高い溶解度を示します。さらに、Capryol®90はミセルの内部コアとして容易に安定化できます[27]。 Capryol®90を選択した後、オレアノール酸ミセルのシェル部分について、いくつかのタイプの界面活性剤またはポロキサマーをスクリーニングしました[27、28、29、30]。表２に示すオレアノール酸ミセル組成物は、蒸留水で希釈した直後に透明であったものである。ただし、一部の組成物は不安定で、24時間以内に沈殿、相分離、またはゲル化を起こしました。沈殿、相分離、透明な液体、およびゲルの状態の代表的な画像を図2に示します。各式の最終状態を表3にまとめています。組成物GおよびHは、24時間後も透明なままでした。組成は透明なままでしたが、液体というよりはゲルでした。組成物AからDは、24時間後に沈殿により不透明になりました。これらの結果を考慮して、組成物GおよびHがさらなる開発のために選択されました。

a の代表的な画像 降水量、 b 相分離、 c 透明な液体、および d オレアノール酸ミセルのゲル化

オレアノール酸の高分子ミセルの特性

オレアノール酸の高分子ミセルの構造を染色試験により調べた。図3は、Capryol®90と蒸留水の混合物、Capryol®90、蒸留水、およびメチレンブルーを添加した後の組成G（PMO-G）および組成H（PMO-H）の高分子ミセルの画像を示しています。ソリューション。 Capryol®90と蒸留水の混合物で明確な相分離が起こりました。 Capryol®90の場合、メチレンブルーの沈殿が観察されました。メチレンブルーの添加後、蒸留水は紺色に変わりました。 PMO-GとPMO-Hも青色に変わり、高分子ミセルが油相の内核と水相の外殻で構成されていることを示しています。言い換えると、両親媒性ポリマーである組成GおよびHのポロキサマー407は、外殻として機能し、オレアノール酸を含むCapryol®90の内部コアをカプセル化することにより、オレアノール酸のポリマーミセルを正常に形成するのに役立ちます[31]。

メチレンブルーを使用した染色試験：（ a ）Capryol®90と蒸留水の混合物（ b ）Capryol®90、（ c ）蒸留水、（ d ）PMO-G、および（ e ）PMO-H

粒子サイズ、サイズ分布、および形状は、ミセル製剤の物理的安定性を予測するための優れた指標となります。 PMO-Gの平均粒度は80.4nm、PMO-Hの平均粒度は57 nmでした（図4）。 PMO-A、G、Hのヒストグラムを図5に示し、相状態の影響を受けるサイズ分布を比較します。表3に示すように、PMO-Aは降水により不透明であり、PMO-GとHは透明です。 PMO-Aの粒度は100nm以上であり、PMO-AはPMO-GやHよりも広い粒度分布を示します（図5）。 PMO-Hは、PMO-Gよりも粒度分布が狭く、化粧品に適した流動性を示します。

表2のPMO-GおよびPMO-Hの平均粒子サイズ：80.4±11.1 nm（PMO-G）および57±5.24 nm（PMO-H）

3つの異なるPMOサンプルの粒子分析ヒストグラム。 a PMO-A、121.28 nm; b PMO-G、80.4 nm;および（ c ）PMO-H、57 nm

PMO-GとPMO-Hの両方のカプセル化効率は99〜100％であり、オレアノール酸のほぼ100％がPMOの内部コアにカプセル化されたことを示しています（図6）。

PMO-GおよびPMO-Hのカプセル化効率は、ほぼ100％の薬物カプセル化効率を示しています：98.26±0.17％（PMO-G）および99.18±1.06％（PMO-H）

PMO-GとPMO-Hの形状は、クライオ走査型電子顕微鏡（Cryo-SEM）によって調査されました。 Cryo-SEMは、PMO-GとPMO-Hの両方が球状の高分子ミセルであることを示しました。ただし、PMO-H高分子ミセルは、PMO-G高分子ミセルよりもサイズと形状が一貫していました（図7）。

a の走査型電子顕微鏡画像 PMO-Gおよび b PMO-H

PMOのinvitro皮膚浸透研究

皮膚に残っているオレアノール酸の総量、および時間の関数として皮膚を透過したオレアノール酸の総量を、6週齢の雌の無毛マウスの皮膚を使用して測定した。 4つの異なる製剤、PMO-G、PMO-H、蒸留水に分散したオレアノール酸とTween 80の混合物（OTw）、および蒸留水に分散したオレアノール酸とプロピレングリコールの混合物（OPG）を皮膚に関して比較しました。オレアノール酸の浸透効率。 24時間後に皮膚に浸透したオレアノール酸の総量は、PMO-Hで29.49±4.00％、PMO-Gで21.39±5.91％、OTwで13.66±0.81％、OPGで5.90±2.47％でした。図7に示すように、PMO-GとPMO-Hの両方の場合のオレアノール酸の最初の検出は8時間で可能でしたが、OTwでのオレアノール酸の最初の検出は10時間で可能であり、OPGは20時間で可能でした。 h。皮膚に残ったオレアノール酸の割合は、PMO-Hで56.22±13.50％、PMO-Gで36.74±0.72％、OTwで27.44±7.02％、OPGで26.28±5.42％でした。 PMO-Hは、皮膚に浸透したオレアノール酸と皮膚に残ったオレアノール酸の両方の量が最も多いことを示しました（図8）。これらの結果は、PMOがミセルを形成しない製剤よりも速く浸透できることを示しています。

蒸留水（Otw）に分散したPMO-G、PMO-H、オレアノール酸、Tween 80混合物中のオレアノール酸の総量と蒸留水（OPG）に分散したオレアノール酸とプロピレングリコールの混合物の総量とオレアノール酸の量時間の関数としての各製剤中の酸。 24時間後に皮膚に残ったオレアノール酸の量：36.74±0.72％（PMO-G）、56.22±13.50％（PMO-H）、27.44±7.02％（Otw）、および26.28±5.42％（OPG）。 24時間後に浸透したオレアノール酸の量：21.39±5.91％（PMO-G）、29.49±4.00％（PMO-H）、13.66±0.81％（Otw）、および5.90±2.67％（OPG）

液体オレアノール酸高分子ミセルの安定性

特性評価とinvitro浸透研究に基づいて、PMO-Hがアンプルの準備のために最終的に選択されました。アンプルを準備する前に、ONM-Hの安定性を評価しました。安定性試験では、PMO-Hを40°C / 75％RHの加速安定性試験条件下で3か月間バイアルに保存しました。次に、沈殿、相分離、色の変化、および透明度を視覚的に評価しました。次に、HPLCを使用してオレアノール酸の割合を測定し、粒子サイズの変化もチェックしました。安定性は経時的にチェックされました。 PMO-Hは沈殿や相分離なしに透明なままであり、その色は加速された安定性条件下で3ヶ月間変化しませんでした。 HPLCで測定したオレアノール酸の割合と粒子サイズの経時変化を図9に示します。オレアノール酸の割合は98％以上を維持し、49.6±5nmの粒子サイズは3か月の安定性の間ほぼ一定のままでした。勉強期間。これらの結果は、PMO-Hが加速安定性条件下で3か月間物理的および化学的安定性があることを示しています。

40°C / 75％RHの加速条件下での3か月の安定性試験中のPMO-Hの含有量と粒子サイズの変化。 PMO-H中のオレアノール酸の割合：100±1.6％（0ヶ月）、99.9±0.2％（1ヶ月）、99.5±0.2％（2ヶ月）、および99.3±0.2％（3ヶ月）。 PMO-Hの粒子サイズ：55.3±6.5 nm（0ヶ月）、54.6±7 nm（1ヶ月）、51.0±5.56 nm（2ヶ月）、および49.6±5 nm（3ヶ月）

臨床テスト

人間の刺激性試験

臨床試験の前に、22〜56歳の25人の健康な女性と男性のボランティアに対して人間の刺激性試験が実施されました。試験製品を被験者の上腕に24時間パッチし、パッチを除去してから30分、24時間、および48時間後に皮膚刺激指数を測定しました。パッチ除去後1時間または48時間でPMO-Hを含む化粧品アンプル処方では刺激は観察されませんでした。

臨床試験

臨床試験は、目の周りにしわのある30〜65歳の23人の女性被験者を対象に実施されました。 3つのドロップアウトを除いて、20人の被験者が、テスト製品、PMO-Hアンプル、およびコントロールの両方を顔の左側または右側に8週間別々に適用して試験を完了しました。皮膚の変化は、主要エンドポイントとしての平均粗さ（R3）と、副次エンドポイントとしての4つの追加パラメーター、つまり皮膚粗さ（R1）、最大粗さ（R2）、滑らかさの深さ（R4）、および算術平均粗さの5つのパラメーターに従って評価されました。 （R5）。視覚的評価スコアは、さらに副次的評価項目を追加しました。結果は表4にまとめられています。

主要評価項目R3は、テスト製品の4週間の使用後に0.673％減少し、8週間の使用後に統計的に有意に7.835％減少しました（ p =0.006）。コントロールアプリケーションでは、R3は4週間の使用後に5.127％増加し、8週間の使用後に統計的に有意に9.971％増加しました（ p =0.010）。テスト製品で処理された領域とコントロールで処理された領域の間のR3値の差は、8週間の使用後に統計的に有意でした（ p =0.000）しかし、おそらく被験者間の変動のために、4週間の使用後は統計的に有意ではありません（図10）。

オレアノール酸の高分子ミセルを含むアンプルと臨床試験中の対照の使用前、使用後、使用前、使用後、および使用後の主要エンドポイント値R3の変化。試験製品使用のR3値：使用前0.094±0.023、4週間使用後0.093±0.023、8週間使用後0.086±0.020。対照製品のR3値：使用前0.087±0.023、4週間使用後0.091±0.025、8週間使用後0.095±0.024（任意単位のA.U.）。 * ¹ R3値のしわ分析は統計的に有意に減少しました。 * ² R3値のしわ分析は統計的に有意に増加しました

副次的評価項目R1の分析では、値が4週間のテスト製品の使用後に4.629％減少し、8週間の使用後に統計的に有意に9.973％減少したことが示されました（ p =0.017）。コントロールアプリケーションでは、R1は4週間の使用後に8.037％増加し、8週間の使用後に4.799％増加しました。テスト製品とコントロールを使用した領域間のR1値の差は、4週間の使用後は統計的に有意ではありませんでしたが、8週間の使用後でした（ p =0.024）。副次的評価項目R2は、試験製品の4週間の使用後に1.048％減少し、8週間後に5.803％減少しました。コントロールアプリケーションでは、4週間後に7.261％、8週間後に9.536％増加しました。テスト製品で処理された領域とコントロールで処理された領域の間のR2値の差は、8週間の使用後に統計的に有意でした（ p =0.016）ただし、4週間の使用後はそうではありません。セカンダリエンドポイントR4は8.594％大幅に減少しました（ p =0.039）テスト製品の4週間の使用後、および8週間の使用後9.747％。コントロールを使用すると、R4は4週間の使用後に10.764％増加し、8週間の使用後に3.491％増加しました。興味深いことに、テスト製品とコントロールを使用した領域間のR4値の差は、4週間の使用後に統計的に有意でした（ p =0.008）ただし、8週間後ではありません。副次的評価項目R5は、試験製品の4週間の使用後に6.333％減少し、8週間の使用後に8.556％減少しました。テスト製品とコントロールを使用した領域間のR5値の差は、4週間または8週間の使用後でも統計的に有意ではありませんでした。

さらなる副次的評価項目であるしわの視覚的評価の分析は、視覚的評価スコアが試験製品の4週間の使用後に2.917％減少し、8週間の使用後に統計的に有意に8.333％減少したことを示しました（ p =0.034）。コントロールを適用すると、視覚的評価スコアは4週間後に1.667％、8週間後に4.167％増加しました。試験製品と対照によって治療された領域間の視覚的評価スコアの差は、8週間の使用後に統計的に有意でした（ p =0.046）ただし、4以降ではありません。

要約すると、目の周りのしわのある領域の分析は、テスト製品とコントロールによって処理された領域間の主要エンドポイント値R3の差が、8週間の使用後に統計的に有意であることを示しました。副次的評価項目に関しては、すべての値は試験製品の使用後に減少し、対照の使用後に増加しました。試験製品で処理した領域と対照で処理した領域のR4値の差は、4週間の使用後に統計的に有意でしたが、R1とR2の値の差は、8週間の使用後にのみ統計的に有意でした（図11 ）。専門家による視覚評価スコアは、しわのすべての平均視覚評価スコアが、対照と比較して、試験製品の治療の4週間および8週間後に減少したことを示しました（表5）。試験製品と対照によって治療された領域間の視覚的評価スコアの差は、8週間の使用後に統計的に有意でした（図12）。全体として、すべてのエンドポイントによると、主成分としてPMO-Hを含む化粧品処方は、8週間の使用後のしわを改善するのに役立つことがわかりました（図13）。

皮膚のしわ測定のための副次的評価項目R1、R2、R4、およびR5の結果-使用前、4週間の使用後、および8週間のテスト製品とコントロールの使用後。正確な値については、表4を参照してください（任意単位のA.U。）

皮膚の視覚的評価の結果—使用前、4週間の使用後、および8週間のテスト製品とコントロールの使用後。テスト製品：使用前は3.050±0.887、4週間使用後は2.95±0.999、8週間後は2.75±0.851。対照製品：使用前は2.900±0.887、4週間の使用後は2.95±0.945、8週間の使用後は3.000±0.918。 * ¹ 専門家によるしわの視覚的評価グレードは大幅に低下しました。 * ² 専門家によるしわの視覚的評価グレードが大幅に向上しました

テストされたエリアの写真

結論

界面活性剤は、難溶性物質の溶解性を改善するために化粧品に一般的に使用される賦形剤です。注意点の1つは、製品に含まれる量です。界面活性剤は、難溶性物質を沈殿させることなく溶解するのに十分な量で添加する必要があります。安全上の理由から、最小限の量だけを追加する必要があります。ミセル製剤は、この問題の解決策になる可能性があります。この研究で開発されたオレアノール酸の高分子ミセルは、最小限の量の界面活性剤でオレアノール酸の溶解性を改善し、皮膚を介したオレアノール酸の浸透を促進します。オレアノール酸の安定した高分子ミセルは、Capryol90とポロキサマーを使用して開発されました。この研究で開発されたオレアノール酸の高分子ミセルは安定していた。つまり、3か月後、40°Cで沈殿、相分離、分解は見られなかった。臨床試験は、主要な有効成分として、高分子ミセル製剤中のオレアノール酸が人間のしわを軽減するのに効果的であることを示しました。これらの発見に基づいて、水に難溶性であり、したがって皮膚のしわを軽減するための主成分として天然の形態では使用できないオレアノール酸は、適用可能な高分子ミセルに処方することができると結論付けることができる。さらに、この研究で開発されたオレアノール酸の高分子ミセルは、人間のしわを軽減するのに非常に有用であり、化粧品用途に広く適用できることが証明されることが期待されます。

データと資料の可用性

該当なし

略語

PMO：

オレアノール酸の高分子ミセル

PEG：

ポリエチレングリコール

TRANSCUTOL P：

高度に精製されたジエチレングリコールモノエチルエーテル

LABRASOL：

PEG-8カプリル酸/カプリン酸グリセリド

LAUROGLYCOL FCC：

プロピレングリコールモノラウレート（タイプI、モノエステル> 45％）

LABRAFAC：

カプリル酸/カプリン酸トリグリセリド

Capryol®90：

プロピレングリコールモノカプリレート（タイプII、モノエステル> 90％）

Capryol™PGMC：

プロピレングリコールモノカプリレート（タイプI、モノエステル> 55％）

EDTA：

エチレンジアミン四酢酸

ELS：

電気泳動光散乱